接头信息知多少？这篇文里找
接头作为文库构建中必不可少的一部分，随着高通量测序技术的日益发展，也在不断的更新。面对市场上令人眼花缭乱的、不同种类的接头，大家是否会茫然无措，不知如何选择呢？接下来就跟随小编一起，盘一盘接头的那些事儿。
复习一下，接头是什么？
接头是建库过程中在DNA片段两端加上能够与测序仪配合测序的一段核苷酸序列。如下图所示为一个完整的双端Index文库，其中蓝色框标记的为接头。
图1. 文库的一般结构
接头产品琳琅满目，我咋选呢？
小编大致将这些接头分了以下几类：
①根据Index位置的不同，接头可以分为单端接头和双端接头。
单端接头：只在P7端存在Index序列；
图2. 单端Index示意图
双端接头：P5和P7两端均存在Index序列；
图3. 双端Index示意图
一般而言，Index序列的碱基数为6 nt或8 nt。以8碱基Index序列为例，单端Index组合理论上可以有48种，双端Index组合理论上可以有416种。考虑到测序时Index组合要满足碱基平衡和激光平衡原则，实际可供选择的Index种类为数不多。但总体来说，双端接头的种类依旧远远多于单端接头，所以大家可以根据自己的样本量的大小来选择单/双端接头。
② 根据能否构建PCR-free文库，接头又可以分为完整接头和不完整接头。
图4. 完整接头与不完整接头的不同扩增方式
完整接头通过TA连接的方式连接到待测DNA片段两端，在文库产量足够的情况下，可不进行PCR扩增直接上机测序，即可构建PCR-Free文库；
不完整接头通过TA连接的方式连接到待测DNA片段两端后，必须使用与短接头互补的Indexing Primers进行PCR扩增成为完整接头后，才能上机测序（小编在此要敲黑板了！使用不完整接头时，文库扩增阶段一定要使用的是接头试剂盒中的含有index序列Primer，而不是不含index序列的通用Primer）。
③ UDI ＆ UMI
为了解决Patterned Flow Cell（Hiseq系列、Novaseq等）中凸显的标签跳跃问题，Illumina提出了“Prepare dual Indexed libraries with unique Indexes”的策略，即在文库的P5和P7端带上独特的标签—UDI（Unique dual Index），采用P5与P7端Index一一对应成组设计的方式，两端交叉验证，能够有效降低Index错误分配的现象。
图5. UDI解决标签跳跃与错配问题
为了从cfDNA中找到低频突变、避免假阳性，引入UMI（Unique Molecular Identifiers）——通过对原始DNA分子片段进行标记，验证测序结果在原始DNA序列上的一致性，进一步剔除假阳性突变，提高低频突变检出。
图6. UMI助力低频突变检出
如上图6-（1）所示，建库扩增或者测序过程中部分碱基发生了突变（标红的碱基），这部分突变其实就是假阳性突变。当经过UMI校正后，这两个假阳性突变可以被剔除掉。而图6-（2）中当真实的低频突变（最右侧的T）与假阳性突变（标红的碱基）同时存在时，通过UMI矫正，不仅保留真实突变（最右侧的T），也可以剔除假阳性（标红的碱基），从而提高了低频突变检出的准确性。图6-（3）中，当不含UMI标签时，无法对真实的突变（最右侧的T）与假阳性突变（标红的碱基）进行区分，最后会得到很多可能的序列，但这些序列并不能反应样本的真实情况。
关于UDI&UMI的具体原理都整合在这一篇推文里<UDI＆UMI的相关介绍传送门：上新品 | 肿瘤低频突变检测必备利器——双端UDI UMI接头>。
Index选择需谨慎，平衡小工具来帮忙
Index/Barcode 的选择是一门技术活。如果Index/barcode 组合不佳,标签序列测序质量下降，部分或者全部标签碱基识别不正确，将导致部分数据无法归属到任何一个样本，成为 undetermined数据，造成浪费。
为此，我们重磅推出Index平衡小工具。双平台通用（Illumina平台与华大平台），根据自己的文库数量，选择所用的接头货号，或者自主输入Index序列，2-3 min即可出结果，是不是超级方便！
使用方法附上——登录网址：http://cloud.vazyme.com:83，工具栏搜索 “BARCODE_INDEX_SELECT_2.0”，进入小工具（就是下图7），页面右侧附有使用说明，在使用过程中如遇到任何问题欢迎咨询身边的诺唯赞人。
图7. Index平衡小工具
Sample sheet填写
详细内容参考往期推文<Sample sheet填写传送门：干货 | NovaSeq 测序试剂的Sample sheet填写，你学废了吗？>
正确填写Index信息，不仅可以避免我们数据拆分时出现正反向拆分的重复性工作，而且也能够避免因Index方向填写错误而造成不同文库之间的污染。
一 公司基本情况速览总股本：1.879亿 总发行量 :4690万 发行**：10.69元 募资总额：5.01亿发行市盈率:20.42倍 行业市盈率:19.12倍所属行业：燃气生产和供应 所属区域：陕西
美能能源（001299）12月6日主力资金净买入1125.28万元
截至2022年12月6日收盘，美能能源(001299)报收于27.53元，上涨2.92%，换手率39.8%，成交量18.67万手，成交额5.05亿元。12月6日的资金流向数据方面，主力资金净流入112
截至2022年11月8日收盘，美能能源(001299)报收于22.69元，上涨3.18%，换手率71.38%，成交量33.48万手，成交额7.75亿元。资金流向数据方面，11月8日主力资金净流出399
专访美能能源董事长晏立群：紧随绿色低碳能源**大潮 捕捉清洁能源发展新商机
90年代初，****前沿的深圳还处在草莽创业的时期，那时候，深圳吸引了一批又一批来自全国各地的年轻人，晏立群就是其中之一。从外出闯荡到回乡扎根，从推销液化气灶具到推广应用天然气，从“打工人”到创业者，
美能能源(001299)7月20日股东户数2万户，较上期减少6.82%
近日美能能源披露，截至2023年7月20日公司股东户数为2.0万户，较7月10日减少1465.0户，减幅为6.82%。户均持股数量由上期的8731.0股增加至9370.0股，户均持股市值为15.18万
美能能源2023年3月22日在深交所互动易中披露，截至2023年3月20日公司股东户数为2.27万户，较上期（2023年2月10日）减少3573户，减幅为13.59%。美能能源股东户数低于行业平均水平
美能能源7月24日在交易所互动平台中披露，截至7月20日公司股东户数为20020户，较上期（7月10日）减少1465户，环比降幅为6.82%。证券时报•数据宝统计，截至发稿，美能能源收盘价为16.20
记者 | 陈慧东编辑 | 10月31日上市首日，美能能源（001299.SZ）高开后一路上涨，两次触及涨停**，于10时01分许封上涨停板。截至收盘，该股股价上涨43.97%，报15.39元/股，成交
美能能源2023年7月18日在深交所互动易中披露，截至2023年7月10日公司股东户数为2.15万户，较上期（2023年6月30日）增加59户，增幅为0.28%。美能能源股东户数低于行业平均水平。根据
多主力现身**榜，美能能源换手率达67.90%（11-24）
深交所2022年11月24日交易***息显示，美能能源因属于当日换手率达到20%的证券而登上**榜。美能能源当收22.57元，涨跌幅为-1.53%，换手率67.90%，振幅10.43%，成交额7.
多主力现身**榜，美能能源换手率达47.30%（11-23）
深交所2022年11月23日交易***息显示，美能能源因属于当日换手率达到20%的证券而登上**榜。美能能源当收22.92元，涨跌幅为9.98%，换手率47.30%，振幅12.57%，成交额4.9
11月30日美能能源（001299）**榜数据：机构净买入6.49万元
沪深交易所2022年11月30日公布的交易***息显示，美能能源（001299）因日换手率达到20%的前5只证券登上**榜。此次是近5个交易日内第5次上榜。截至2022年11月30日收盘，美能能源(0
美能能源将开启申购：上半年增收不增利，预计上市时市值20亿元
10月17日，陕西美能清洁能源集团股份有限公司（下称“美能能源”，SZ:001299）披露发行公告，并将于2022年10月18日开启申购。本次上市，美能能源的发行价为10.69元/股，发行市盈率20.
美能能源（001299）11月15日主力资金净卖出2095.05万元
截至2022年11月15日收盘，美能能源(001299)报收于20.1元，下跌1.03%，换手率21.43%，成交量10.05万手，成交额2.01亿元。11月15日的资金流向数据方面，主力资金净流出2
深交所2022年10月31日交易***息显示，美能能源因属于无**涨跌幅**的证券而登上**榜。美能能源当收15.39元，涨跌幅为43.97%，换手率7.15%，振幅23.95%，成交额5142.
陕西又一城燃公司IPO过会，美能能源“内生式增长”成效几何？
华夏时报（www.chinatimes.net.cn）记者 苗诗雨 陆肖肖 北京报道继陕天然气（002267.SZ）后，陕西第二家区域性城燃公司即将于近日上市发售。天然气资源和油气资源丰富的陕西地区，
加码新能源领域投资 美能能源拟投建集团总部暨西安智慧能源研究院
本报记者 殷高峰11月14日，美能能源发布公告称，公司与西安高新区管委会拟签订《美能能源总部暨西安智慧能源研究院建设项目协议书》，公司计划在西安高新区上市企业园建设美能能源总部暨西安智慧能源研究院，总
多主力现身**榜，美能能源换手率达55.10%（11-25）
深交所2022年11月25日交易***息显示，美能能源因属于连续三个交易日内收盘**涨幅偏离值累计20%、当日换手率达到20%的证券而登上**榜。美能能源当收24.83元，涨跌幅为10.01%，换
多主力现身**榜，美能能源换手率达32.22%（05-29）
深交所2023年5月29日交易***息显示，美能能源因属于当日换手率达到20%的证券而登上**榜。美能能源当收18.72元，涨跌幅为3.43%，换手率32.22%，振幅12.43%，成交额2.73
11月7日美能能源（001299）**榜数据：机构净卖出1216.39万元
沪深交易所2022年11月7日公布的交易***息显示，美能能源（001299）因日换手率达到20%的前5只证券登上**榜。此次是近5个交易日内第3次上榜。截至2022年11月7日收盘，美能能源(001
